流式管(流式管规格)




流式管,流式管规格

很多同学做流式细胞实验,还有一些问题:

如何进行实验设计?细胞悬液样本怎么制备?流式细胞仪器怎么使用?如何分析流式检测的结果图?

今天就给大家总结了一波从「实验设计」到「结果分析」的全流程 protocol,以下内容来自丁香实验「流式细胞术」,超全 protocol 不断更新,建议点击收藏!

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设计你的流式细胞实验

很多同学在实验设计的时候就埋下了隐患,最常见的问题就是——对照设置不合理,最后导致整体实验失败或数据不理想。

流式对照至少有 5 种。

生物学对照,空白对照,同型对照(Isotype control),补偿对照(也叫单阳性对照)和 FMO 对照,主要目的是为了避免出现的假阳性或假阴性结果。

看不懂以上对照的含义也没关系,我们以一个具体的凋亡实验来看看如何设置对照组:

细胞悬液样本制备

流式细胞术的分析检测建立在单个细胞的基础上,所以制备合格的单个分散的细胞悬液是非常关键的一环。

对不同来源和不同形式的样品,根据各种样品的特点可选择不同的分散方法。

单层培养细胞、血液、各种脱落细胞等样品

标本经过简单的制备悬液,离心分离处理,就可以得到分散较好的单个细胞悬液,是理想的流式细胞术检测对象。

不同组织来源的实体组织标本

采用酶消化法、机械法和化学试剂处理法来分散细胞。

石蜡包埋组织单细胞悬液

可使大量存档的临床资料重新得到研究与利用,从而扩大了流式细胞术的应用范围。样品制备一般通过切片、脱脂、水化、消化及终止消化后过滤再收集细胞悬液,去除碎片的单细胞悬液用 70% 乙醇固定保存。

第三步

流式检测操作流程

很多同学第一次操作流式细胞仪器的时候非常紧张,生怕哪一步做错,弄坏了上百万的实验设备。 仪器的操作确实有很多讲究,比如:

「检查供液槽和废液槽:供液槽应含足够的仪器缓冲液,废液槽应在上次使用后清洗干净。」

流式细胞仪器使用方法和流程已帮大家做好梳理:

第四步

流式检测结果分析

实验结果图通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种。

由数据还可以做出标准曲线进行定量分析。不过很多新同学很难读懂图片代表的含义。

想要了解「Gate」和 「Regin」?流式图中的阴/阳(N/P)如何划分?坐标轴的意义?二维图怎么看?等等问题。

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策划|静静菌、Olaf

配图|丁香实验设计团队

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